Содержание

Осмотическая резистентность эритроцитов


Осмотическая резистентность эритроцитов

Эритроциты – красного цвета кровяные тельца, как и все «организмы», имеют определенный срок жизнедеятельности.

Длительность существования данного компонента определяют интервалом времени, которое начинается с момента образования «красной клетки» до времени ее разрушения организмом человека (впрочем, любым организмом млекопитающего).

Лимфатическая система человека добавляет, так называемые, маркеры к уже не пригодным эритроцитам, с помощью которых селезенка определит и выводит непригодные клетки из системы кровообращения человека.

При выводе из системы, эритроциты подвергаются разложению на различные вещества. Так, к примеру, железо, образуемое при распаде – билирубин, отправляется в печень для дальнейшего использования в организме.

Эритроцит, для нормальной функциональности, должен быть довольно прочным и эластичным. Также, должен сопротивляться разрушению под воздействием осмотического давления. Свойство, сопротивляться разрушения под активным действием осмотического давления, эритроцитов называется осмотической резистентностью эритроцитов.

Метод определения резистентности

В лабораторных условиях стойкость к разрушению эритроцитов проводят при помощи ввода в равные объемы крови солевых растворов, причем различной концентрации. Осмотическая насыщенность жидкости в обычных условиях организма внутри и снаружи жидкости равна. При проведении данного анализа выявляют стабильность мембран эритроцитов. Причем, в гипертоническом солевом растворе эритроциты теряют воду, обретают сморщенный вид. В гипотоническом – эритроциты наоборот перенасыщаются водой, увеличиваются в размерах до пикового уровня. Превышение в размерах эритроцита сопровождается гемолизом, в ходе которого происходит выброс гемоглобина в кровь.

Количество эритроцитов, которое считается нормальным в изотоническом растворе, то есть в норме, принято считать за сто процентов. Критическое количество эритроцитов в крови человека 146 процентов. Недавно мы публиковали статью о пониженном объеме эритроцитов в крови, ознакомьтесь, будет интересно.

Зависимости от зрелости

Осмотическая резистентность эритроцитов напрямую зависит от их возраста, зрелости, формы самого эритроцита и состава плазмы крови. Касательно формы эритроцита, то она определяется при помощи сопоставления размеров, толщины и диаметра. Нормальный размер эритроцита называют индекс сферичности. Нормальный индекс сферичности составляет 0,27-0,28. Данный индекс может быть значительно отличавшимся от нормы, к примеру, при наследственности шарообразных эритроцитов. Данное проявление эритроцитов в значительном образе снижает стойкость эритроцитов к осмотическому давлению.

Норма устойчивости 0,32-0,44 процента раствора NaCl, в случае шарообразных эритроцитов 0,4-0,6 процента. Также, округлую форму имеют эритроциты, которые находятся на стадии завершения своего жизненного пути.

Наиболее резистентными эритроцитами являются те, которые появляются в кровотоке, выходя из костного мозга, а наиболее стойкими — молодые красные тельца, которые имеют более плоскую форму, с незначительным индексом сферичности.

Причины изменения осмотической резистентности эритроцитов

Причинами увеличения стойкости эритроцитов является механическая желтуха, в течение чего происходит адсорбция холестериновых отложений на эритроцитов. Артериосклероз, на эритроцитах начинают скапливаться продукты распада белка. Раковые заболевания желудочно-кишечного тракта. Кровопотеря.

В последних двух случаях кровь перенасыщается незрелыми эритроцитами, которые имеют малый индекс сферичности. К уменьшению устойчивости к осмотическому давлению, может приводить следующее:

  • недостаточная работа сердца, эритроциты в данном случае набухают, приобретают высокий индекс сферичности, что приводит к их малому сроку жизни;
  • наследственность, связанная с большим количеством шарообразных эритроцитов;
  • конечные стадии жизни эритроцитов, старение, и, как продолжение приобретения шарообразной формы, значительное увеличение проницаемости стенок эритроцитов.

Симптоматика

Симптомами нарушения осмотической резистентности эритроцитов можно считать следующее:

  • быстрая общая утомляемость;
  • упадок сил;
  • полное отсутствие аппетита;
  • повышение температуры тела, может достигать значительных отметок;
  • потеря веса;
  • постоянная сонливость;
  • бледность видимых слизистых оболочек.

В течение данного нарушения иммунная система организма помечает маркерами, а в дальнейшем выводится селезенкой из организма большое количество эритроцитов. Печень не в полной мере справляется с билирубином, образовавшемся в ходе распада эритроцитов. Результатом такого процесса в организме происходит развитие болезни называемой гемолиз. Конечным этапом такого течения, есть недостаток эритроцитов в крови, что ведет за собой недостаточное насыщение клеток и тканей организма кислородом.

hematologiya.ru

3. Методика определения осмотической резистентности эритроцитов и диаметра эритроцитов. Определение скорости оседания эритроцитов (соэ). Диагностическое значение.

Резистентность – свойство эритроцитов противостоять разрушительным воздействиям: тепловым, осмотическим, механическим и др. В клинике наибольшее значение приобрело определение осмотической резистентности.

Принцип метода состоит в том, что эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических – набухают. При значительном набухании наступает гемолиз.

В пробирках готовят растворы хлорида натрия различной концентрации (от 0.70 до 0.22%), затем вносят в них один и тот же объем крови (0.02 мл) и оставляют на час при комнатной температуре. Через час пробирки центрифугируют и определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора и полный гемолиз – по интенсивной красно-лаковой окраске раствора.

В норме минимальная резистентность у взрослых людей колеблется между 0,48% и 0,46% хлорида натрия, максимальная – между 0,34% и 0,32% хлорида натрия.

Снижение осмотической резистентности эритроцитов наблюдается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), аутоиммунных гемолитических анемиях. Повышение осмотической резистентности эритроцитов встречается при наследственных гемолитических анемиях, связанных с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, при некоторых гемоглобинопатиях (талассемия).

Измерение диаметра эритроцитов и графическую регистрацию распределения эритроцитов по величине (эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса) производят с помощью прямых микроскопических и электронно-автоматических методов.

Прямой микроскопический метод – это измерение диаметра эритроцитов в фиксированном и окрашенном мазке крови с использованием окуляр – микрометра и объектив-микрометра. Измеряют диаметр 200-500 различных эритроцитов, результаты распределяют по группам в зависимости от величины диаметра и устанавливают в процентах (%) относительную численность каждой группы.

Нормы: содержание нормоцитов (диаметр 6.9-8.0 мкм) составляет приблизительно 68%, микроцитов (диаметр менее 6.9 мкм) – 15%, макроцитов (диаметр более 8.0 мкм) – 17%.

Прямой микроскопический метод чрезвычайно трудоемок, отнимает много времени и поэтому уступает электронно-автоматическому методу.

Электронно-автоматический метод – это подсчет эритроцитов различного диаметра с помощью счетчиков «Культер» и «Целлоскоп».

Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса в норме имеет правильную форму с вершиной на 7.2 мкм и довольно узким основанием в пределах 6-9 мкм.

Увеличение диаметра эритроцитов (макроцитоз) со сдвигом кривой Прайс – Джонса вправо наблюдается при мегалоцитарных анемиях (витамин-В12-фолиеводефицитные), при заболеваниях печени, при алкоголизме.

Уменьшение диаметра эритроцитов (микроцитоз) со сдвигом эритроцитометрической кривой влево встречается при наследственном микросфероцитозе, железодефицитной анемии, интоксикации свинцом.

Нормальные эритроциты имеют форму диска с вдавлением в центре. В патологических случаях могут появлять­ся эритроциты с измененной формой. Изменение формы эритроцитов называется пойкилоцитозом. Встречаются следующие формы эритроцитов.

Сфероциты - эритроциты, имеющие округлый или ша­рообразный вид, утратившие двояковогнутую форму. Микросфероциты имеют иногда обычные размеры. Сфероцитоз бывает на

Осмотическая резистентность эритроцитов

Обращаясь к врачу, больного для точного диагноза направляют на различные лабораторные исследования. На сегодняшний день медицина предлагает множество разных диагностик, направленных на выявление патологий, вирусов, микробов и прочее. Одним из таких является метод осмотической резистентности эритроцитов. Его применяют при подозрении на гемолитическую анемию, сердечную недостаточность, талассемию, желтуху, артериосклероз и т. д. Эта статья познакомит со всеми важными нюансами метода, расскажет какие показатели ОРЭ считаются нормой и по каким причинам возможно их отклонение.

Осмотическая резистентность эритроцитов
Применение осмотической резистентности эритроцитов в диагностических целях.

Что это такое

Осмотическая резистентность эритроцитов представляет собой одну из доступных диагностик, с помощью которой осуществляется оценка физико-химических особенностей эритроцитных мембран. Исследование заключается в изучении крови пациента. К основным целям исследования следует отнести:

Как проводится процедура

Обычно перед проведением лабораторных исследования больному необходима подготовка. Но диагностика методом ОРЭ не подразумевает специального режима питания, отказа от чего-либо. Сама процедура заключается во взятии пункции крови из вены, которая набирается в пробирку с гепарином. Если после этого у пациента появилась гематома, для её удаления нужно применить согревающий компресс. Следует уточнить, что исследование также имеет минусы, среди них:

  • Длительность выполнения.
  • Трудоёмкость.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Существуют разные модификации исследования ОРЭ:

  1. Визуальный способ Лимбека и Рибьера. Во время диагностики по 20 мл. капилярной крови добавляют в пробирки, где имеется по 10 мл. раствора NaCL. Далее смесь нужно выдержать один час, в это время в комнате должна быть температура не меньше 15 и не больше 25 градусов. После используют цетрифугирование на протяжении трёх минут, при 2000 об/мин. Завершив эти действия, лаборант приступает к определению максимального, минимального уровня резистентности. Этот метод заключается в использовании немалого количества крови, характеризуется низкой точностью, а также не следует общепринятым нормативам.
  2. Колориметрический – подразумевает прямое определение концентрации гемоглобина, который выходит из эритроцитов во время гемолиза. В пробирки, куда заблаговременно был добавлен раствор NaCl, добавляют эритроциты, а после гемометром Сали устанавливают концентрацию гемоглобина. Затем чертят кривую гемолиза. Способ имеет такие же недостатки, как и предыдущий.
  3. Метод Л.И.Идельсона. Берут пару пробирок, куда предварительно добавляют по две капли гепарина, а после по 1,5 мл. крови из вены. Одну смесь изучают сразу, а второй дают постоять сутки в термостакане, температура в котором должна быть 37 градусов. Так, для первой диагностики, берут 14 цетрифужных пробирок, куда требуется разлитие по 5 мл. NaCl, концентрация данного раствора должна достигать 1,0 %, и добавляют также по 0,02 мл. крови из первой пробирки с гепарином. Эти ёмкости должны выдержаться полчаса, а затем они центрифугируются при 2000 об/мин. Завершает процедуру фотоколориметрирование насадочной жидкостью, характеризующейся содержанием 1% раствора хлорида натрия. И только потом осуществляется определение интенсивности гемолиза. Такие же действия проводят и со второй пробиркой, которая должна выдержаться сутки.
  4. Ещё один способ заключается в смешивании в кювете спектрофотометра эритроцитов вместе с раствором NaCl и регистрации оптической плотности. Длина волны здесь достигает 650 нм, а температура комнаты 20 градусов. Одним из главных минусов способа является обязательное наличие спецоборудования.
  5. Регистрация оптической плотности растворов, содержащих NaCL, во время прохождения света с волновой длиной в 670-750 нм. Диагностика проводится за несколько минут.
  6. Модификация метода Л.И.Идельсона. Берут три пробирки с 0,01 мл. крови в каждой, эта смесь на протяжении 10 минут проходит центрифугирование, при 2000 об/мин. Далее с помощью спектрофотометра, длина волны которого 414 нм, оценивается, как происходит световой поглощение надосадочной жидкостью. Данный способ сократил трудоёмкость, затраты на лабораторную посуду, но все же имеется и недостаток. Так, интенсивность поглощения может меняться из-за формы гемоглобина.

Показатели нормы

Показатели стойкости эритроцитов норма:

  • Минимальная ОРЭ – концентрация натрия хлорида на уровне 0,5-0,45%.
  • Максимальная ОРЭ – концентрация натрия хлорида на уровне 0,4-0,35%.

Допустимо небольшое отклонения показателя у пожилых людей и детей, а именно снижение и повышение соответственно.

Отклонения от нормы

Отклонения от нормы могут произойти в сторону понижения или повышения. К причинам первого состояния стоит отнести наличие наследственного сфероцитоза или когда это заболевание возникло в результате приобретённой иммунной гемолитической анемии. Также этот список дополняет наследственный стоматоцидоз. Что касается второго состояния, оно может быть вызвано лептоцитозом, осложнённой аспленией, недугами печени, гипохромной микроцитарной анемией, к примеру, талассемией или железодефицитной анемией.

Причины отклонения

Изменения осмотической резистентности происходят по причине таких факторов:

  • Был неправильно подобран анткоагулянт или плохо наполнена пробирка кровью, а также её плохое смешивание с антикоагулянтом.
  • Неосторожное обращение с биоматериалом.
  • В пробе имеются микроорганизмы, которые вызывают гемолиз.
  • Болезни, во время которых снижено количество эритроцитов для исследования. К примеру, пациент может страдать от тяжелой анемии.
  • Накануне диагностики проводилось переливание крови.
  • Наличие возбудителя малярии приводит к гемолизу, несмотря на условия проведения процедуры.

Причины отклонения от нормы

Признаки нарушения осмотической устойчивости

Считается, что чем меньше ОРЭ, тем раньше наблюдается гемолиз. Причины нарушения осмотической устойчивости кроются в негативных изменениях в функциональных, структурных свойствах мембраны эритроцитов. В свою очередь это происходит вследствие различных врождённых, приобретённых болезней. К примеру, меняет структуру мембран наследственный дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и микросфероцитоз, некоторые недуги органов, тканей. Также к признакам нарушения относится:

  • Быстрая утомляемость.
  • Постоянно хочется спать.
  • Кожа становится бледной.
  • Отказ от пищи.
  • Повышается температура тела.
  • Беспричинная потеря веса.

Вышеперечисленное свидетельствует о кислородном голодании тканей организма.

Что предпринять

Когда осмотическая резистентность эритроцитов показала отклонения, врачом назначаются дополнительные исследования, чтобы установить точную причину такого состояния. Если становится ясно, что причина кроется не в генетическом недуге, тогда курс терапии приводит эритроциты в норму. При таком лечении больному назначают фолиевую кислоту, железосодержащие препараты, а также кортикостероидные гормоны. Когда имеют место быть тяжелые случаи и частые обострения недугов, прибегают к хирургическому вмешательству для удаления селезёнки.

Лекарственная терапия

Профилактика

На сегодняшний день не существует профилактических мер, направленных на предотвращение резистентности эритроцитов. Часто такие нарушения связаны с наследственностью. В этом случае пациенту необходимо обратиться к генетику, чтобы не передать эту проблему своему потомству. Профилактика необходима для предотвращения развития гемолитического криза. Так, больному нужно обеспечить условия для хорошего кроветворения. Ему назначают витамины, лекарство, защищающее от анемии. Помимо этого, потребуется соблюдение специальной диеты, характеризующейся достаточным содержанием железа. Такие меры помогут улучшить показатели ОРЭ.

Зависимость резистентности от формы и зрелости эритроцита

На ОРЭ оказывает влияние форма, возраст клеток. Когда эритроциты в норме у них индекс сферичности небольшой, но при этом в крови могут наблюдаться элементы, имеющие шарообразную форму и низкую устойчивость к разрушению. Они понижают резистентность до 0,4-0,6%. Такая форма может быть наследственной. Также шарообразная форма элементов встречается у зрелых клеток, завершающих жизненный цикл.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Показатель определяется путем помещения эритроцитов в гипотонический раствор NaCl разной концентрации. Гемолиз начинается в 0,46% растворе (минимальная граница резистентности) и заканчивается (полный гемолиз) в 0,30% растворе (максимальная граница резистентности). Снижение осмотической резистентности наблюдается при гемолитических, токсических, В12 – дефицитных анемиях и при миелолейкозе. Повышение осмотической резистентности наблюдается при гипохромных железодефицитных анемиях.

Дайте клиническую оценку периферическому ретикулоцитозу

Ретикулоциты - поступающие из костного мозга молодые (созревающие) эритроциты, характеризующиеся наличием в их цитоплазме зернисто-сетчатых структур в виде сетки (ретикулума).

В крови здорового человека содержание ретикулоцитов колеблется от 10 до 100х109 / л и обычно не превышает 10 клеток на 1000 эритроцитов (10‰).

По величине ретикулоцит больше эритроцита. Ретикулоцит после выхода из костного мозга в течение 3 суток превращается в зрелый эритроцит.

Периферический ретикулоцитоз

  1. является показателем функционального состояния костного мозга, обусловлен повышенным выходом молодых эритроцитов из костного мозга, свидетельствует о повышенной деятельности костного мозга (усиление физиологической регенерации), имеет положительное значение, когда он возникает только при снижении количества эритроцитов (при анемиях).

  2. появляется при раздражении отдельных участков костного мозга раковыми метастазами.

  3. свидетельствует о гипопластическом состоянии костного мозга, когда держится длительно и не сопровождается повышением количества эритроци­тов.

  4. имеет диагностическое значение, указывая на существование источника раздражения костного мозга, например:

  • ретикулоцитарная реакция при желтухе указывается на то, что причиной желтухи может быть гемолиз;

  • при брюшном тифе, язвенной болезни помогает выявить скрытое кровотечение;

  • ретикулоцитарная реакция наблюдается после острой кровопотери в небольшом объеме;

  • ретикулоцитарная реакция при лечении анемии является признаком эффективности проводимой терапии гемопоэтическими препаратами — железом, витамином В12, фолиевой кислотой. После начала лечения количество ретикулоцитов в периферической крови увеличивается. Это называется ретикулоцитарным кризом.

Назовите цифры содержания лейкоцитов в крови здорового человека

У здорового человека в периферической крови содержится 4-9х109/л лейкоцитов. Физиологически число лейкоцитов минимально утром и увеличивается к вечеру.

Лейкоциты являются элементом крови, быстро реагирующим на различные внешние воздействия и изменения внутри организма.

Процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов называется лейкоцитарной формулой. Наибольший процент (50-70 %) составляют нейтрофильные гранулоциты, среди которых выделяют сегментоядерные нейтрофилы (47-72 %), палочкоядерные (1-6 %).

Гранулоциты живут от 3 до 9 суток. 60 % общего числа нейтрофилов находятся в костном мозге, составляя костномозговой резерв, около 40% - в других тканях и лишь менее 1 % - в периферической крови. Нейтрофильные гранулоциты являются фагоцитами, способными переваривать бактерии и грибы. Кроме того, эти клетки продуцируют белок, связывающий витамин В12. Именно поэтому при заболеваниях с высоким содержанием нейтрофилов (например, при хроническом миелолейкозе) в сыворотке крови значительно повышено содержание витамина В12.

14.4.4. Изменение резистентности эритроцитов

Резистентность (стойкость) эритроцитов - способность их противостоять различным разрушительным воздействиям: осмотическим, механическим, химическим, физическим и пр. Наибольшее практическое значение имеет определение осмотической резистентности - устойчивости эритроцитов в гипотонических растворах. Осмотическая резистентность эритроцитов определяется по соотношению площади поверхности клетки к ее объему. Объемные эритроциты (сфероциты, стоматоциты) характеризуются пониженной, а плоские (гипохромные, мишеневидные) эритроциты - повышенной осмотической резистентностью.

Как уже указывалось выше (см. разд. 14.4.2), в гипертонических солевых растворах эритроциты теряют воду и сморщиваются, а в гипотонических - поглощают воду и набухают. При значительном набухании происходит гемолиз. Изотоническим раствором для эритроцитов является 0,85% раствор хлорида натрия. В 0,48-0,44% растворах NaCl разрушаются наименее резистентные эритроциты (минимальная осмотическая резистентность, верхняя граница резистентности). При концентрации 0,32-0,28% полностью гемолизируются все эритроциты (максимальная осмотическая резистентность, нижняя граница резистентности).

Уменьшение осмотической резистентности эритроцитов (повышение показателей минимальной и максимальной резистентности) отмечается при аутоиммунной гемолитической анемии, обусловленной тепловыми антителами, гемолитической болезни новорожденных и наследственных микросфероцитозе, стоматоцитозе, а также (в слабой степени выраженности) при токсикозах, бронхопневмониях, гемобластозах, циррозах печени и др. Увеличение осмотической резистентности эритроцитов имеет место при механической желтухе, в некоторых случаях полицитемии и железодефицитной анемии, а также при талассемии, гемоглобинозе S и после массивных кровопотерь.

14.4.5. Изменения количественного и качественного состава гемоглобина

Гемоглобин - основной компонент эритроцитов (составляет около 95% сухого остатка). По химической природе гемоглобин относится к хромопротеидам и имеет в своем составе белок (глобин) и комплексное соединение железа и протопорфирина IX (гем).

Различие аминокислотного состава полипептидных цепей глобина определяет гетерогенность молекулы гемоглобина. В эритроцитах человека на разных этапах развития в норме определяются 6 типов гемоглобина: эмбриональный (Gower 1, Gower 2, Portland), фетальный (HbF), взрослый (НЬА1, НЬА2). Время появления гемоглобинов в организме и их количественное соотношение представлено в табл. 14-17.

Таблица 14-17. Типы гемоглобина в онтогенезе человека (по А.В. Папаян, Л.Ю. Жуковой, 2001)

У взрослого человека основную массу гемоглобина в эритроцитах составляет гемоглобин А (гемоглобин взрослых): А1 и А2. Около 1-2% приходится на гемоглобин F. Увеличение содержания HbF в крови отмечается при гетерозиготном и гомозиготном вариантах β-талассемии, у больных гемоглобинопатиями с дефектами β-цепей (HbSS, SС и др.), при апластических анемиях, лейкозах. При α-талассемии могут обнаруживаться тетрамеры γ- или β-цепей. Уровень HbА2 повышается (свыше 3,4%) также у носителей гена β-талассемии, при мегалобластных анемиях, связанных с недостаточностью витамина В12 и фолиевой кислоты. Снижение уровня HbА2 характерно для α-талассемии, железодефицитной и сидеробластной анемий.

Мутации в генах, ответственных за синтез гемоглобина, сопровождаются образованием аномальных гемоглобинов, что характерно, в частности, для серповидно-клеточной анемии (HbS), гомозиготных гемоглобинопатий (HbСС, HbEE, HbDD и др.).

Гемоглобин определяет цвет крови. В крови гемоглобин существует в двух основных формах: оксигемоглобин (HbO2), придающий артериальной крови ярко-красный цвет, и дезоксигемоглобин (восстановленный гемоглобин, HbH), обусловливающий темнокрасную с синеватым оттенком окраску крови. Некоторые патологические формы гемоглобина, неспособные к переносу кислорода к тканям, могут изменять цвет крови. К ним относятся метгемоглобин (гемиглобин, HbMet) и сульфгемоглобин (SHb), образующиеся в результате токсического действия различных химических веществ (нитраты и нитриты, анилин, бензол, пиридин и др.). Их физиологический уровень в крови не превышает 1%. Присутствие в крови HbMet, SHb свыше 15% придает крови коричневый цвет («шоколадная кровь»). В противоположность HbMet и SHb, карбоксигемоглобин (HbCO), формирующийся при отравлении угарным газом (СО) и карбонилами металлов (Ni(CO)4; Fe(CO)5), имеет яркий вишнево-красный цвет, и его присутствие нельзя ви-

зуально определить по цвету крови. Для определения содержания СО в крови проводятся спектрофотометрический анализ крови, а также цветовые химические пробы с формалином, дистиллированной водой, меняющими ярко-красный цвет СО-содержащей крови на малиновый, или реакция с 50% раствором КОН, придающим крови в присутствии СО коричневато-красный оттенок.

Биология для студентов - 25. Методы определения резистентности эритроцитов

Резистентность — свойство эритроцитов противостоять разрушительным воздействиям: осмотическим, механическим, тепловым и др. В клинике наибольшее значение приобрело определение осмотической резистентности. Эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических — набухают. При значительном набухании наступает гемолиз.

Готовят в пробирках растворы хлорида натрия различной концентрации (от 0,7 до 0,22%), затем вносят в них один и тот же объем крови (0,02 мл) и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. Через 1 ч пробирки центрифугируют и определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора и полный гемолиз — по интенсивной красно-лаковой окраске раствора. В норме минимальная резистентность у взрослых людей колеблется между 0,48—0,46% NaCl, максимальная — между 0,34—0,32% NaCl. 

Наиболее простым способом определения резистентности эритроцитов является способ Лимбек — Рибьера. В серии пробирок, приготовленных для реакции, делают ряд разведений раствора NaCl с расчётом, чтобы концентрация жидкости в каждой следующей пробирке была на 0,02 ниже предыдущей. Для этого в первую из пробирок отмеряют 0,6 куб. см основного 1 % раствора NaCl, во вторую — 0,58куб. см, в третью—0,56 куб. см и т. д., уменьшая содержание основного раствора в каждой следующей пробирке на 0,02. Последняя из них содержит всего 0,30 куб. см основного раствора. Затем при помощи пипетки в каждую из пробирок вносят дистиллированную воду с расчётом, чтобы объём всего раствора довести до 1 куб. см.

Приготовив ряд разведений, набирают пипеткой из гемоглобинометра Сали 20 мм крови и смешивают её с раствором в первой пробирке. Точное такое же количество крови отмеряют и во все остальные пробирки. Перемешав жидкость и выждав затем 10—15 минут, пробирки устанавливают в центрифугу на 5 минут и просматривают результаты. Там, где произошёл полный гемолиз, жидкость окрашена в ярко-красный цвет и является совершенно прозрачной. В пробирках с частичным гемолизом окраска выражена слабее и на дне можно заметить кроваво-красный осадок. Совершенно бесцветные растворы указывают на отсутствие следов гемолиза.

Таким образом, при исследовании нормальной крови в пробирках с раствором, близким к изотоническому, жидкость остаётся совершенно бесцветной и прозрачной. Лёгкое желтоватое окрашивание раствора указывает на начало гемолиза (минимальная резистентность), в то время как слабое покраснение— показатель ясного гемолиза. При сильном гемолизе, несмотря на вишнево-красную окраску жидкости, на дне пробирки можно заметить небольшой осадок. Полный гемолиз даёт резкую красную окраску жидкости без следов осадка (максимальная резистентность).

Осмотическая резистентность эритроцитов

Эритроциты – красного цвета кровяные тельца, как и все «организмы», имеют определенный срок жизнедеятельности.

Длительность существования данного компонента определяют интервалом времени, которое начинается с момента образования «красной клетки» до времени ее разрушения организмом человека (впрочем, любым организмом млекопитающего).

Лимфатическая система человека добавляет, так называемые, маркеры к уже не пригодным эритроцитам, с помощью которых селезенка определит и выводит непригодные клетки из системы кровообращения человека.

При выводе из системы, эритроциты подвергаются разложению на различные вещества. Так, к примеру, железо, образуемое при распаде – билирубин, отправляется в печень для дальнейшего использования в организме.

Эритроцит, для нормальной функциональности, должен быть довольно прочным и эластичным. Также, должен сопротивляться разрушению под воздействием осмотического давления. Свойство, сопротивляться разрушения под активным действием осмотического давления, эритроцитов называется осмотической резистентностью эритроцитов.

Метод определения резистентности

В лабораторных условиях стойкость к разрушению эритроцитов проводят при помощи ввода в равные объемы крови солевых растворов, причем различной концентрации. Осмотическая насыщенность жидкости в обычных условиях организма внутри и снаружи жидкости равна. При проведении данного анализа выявляют стабильность мембран эритроцитов. Причем, в гипертоническом солевом растворе эритроциты теряют воду, обретают сморщенный вид. В гипотоническом – эритроциты наоборот перенасыщаются водой, увеличиваются в размерах до пикового уровня. Превышение в размерах эритроцита сопровождается гемолизом, в ходе которого происходит выброс гемоглобина в кровь.

Количество эритроцитов, которое считается нормальным в изотоническом растворе, то есть в норме, принято считать за сто процентов. Критическое количество эритроцитов в крови человека 146 процентов. Недавно мы публиковали статью о пониженном объеме эритроцитов в крови, ознакомьтесь, будет интересно.

Зависимости от зрелости

Осмотическая резистентность эритроцитов напрямую зависит от их возраста, зрелости, формы самого эритроцита и состава плазмы крови. Касательно формы эритроцита, то она определяется при помощи сопоставления размеров, толщины и диаметра. Нормальный размер эритроцита называют индекс сферичности. Нормальный индекс сферичности составляет 0,27-0,28. Данный индекс может быть значительно отличавшимся от нормы, к примеру, при наследственности шарообразных эритроцитов. Данное проявление эритроцитов в значительном образе снижает стойкость эритроцитов к осмотическому давлению.

Норма устойчивости 0,32-0,44 процента раствора NaCl, в случае шарообразных эритроцитов 0,4-0,6 процента. Также, округлую форму имеют эритроциты, которые находятся на стадии завершения своего жизненного пути.

Наиболее резистентными эритроцитами являются те, которые появляются в кровотоке, выходя из костного мозга, а наиболее стойкими — молодые красные тельца, которые имеют более плоскую форму, с незначительным индексом сферичности.

Причины изменения осмотической резистентности эритроцитов

Причинами увеличения стойкости эритроцитов является механическая желтуха, в течение чего происходит адсорбция холестериновых отложений на эритроцитов. Артериосклероз, на эритроцитах начинают скапливаться продукты распада белка. Раковые заболевания желудочно-кишечного тракта. Кровопотеря.

В последних двух случаях кровь перенасыщается незрелыми эритроцитами, которые имеют малый индекс сферичности. К уменьшению устойчивости к осмотическому давлению, может приводить следующее:

  • недостаточная работа сердца, эритроциты в данном случае набухают, приобретают высокий индекс сферичности, что приводит к их малому сроку жизни;
  • наследственность, связанная с большим количеством шарообразных эритроцитов;
  • конечные стадии жизни эритроцитов, старение, и, как продолжение приобретения шарообразной формы, значительное увеличение проницаемости стенок эритроцитов.

Симптоматика


Симптомами нарушения осмотической резистентности эритроцитов можно считать следующее:

  • быстрая общая утомляемость;
  • упадок сил;
  • полное отсутствие аппетита;
  • повышение температуры тела, может достигать значительных отметок;
  • потеря веса;
  • постоянная сонливость;
  • бледность видимых слизистых оболочек.

В течение данного нарушения иммунная система организма помечает маркерами, а в дальнейшем выводится селезенкой из организма большое количество эритроцитов. Печень не в полной мере справляется с билирубином, образовавшемся в ходе распада эритроцитов. Результатом такого процесса в организме происходит развитие болезни называемой гемолиз. Конечным этапом такого течения, есть недостаток эритроцитов в крови, что ведет за собой недостаточное насыщение клеток и тканей организма кислородом.

Работа 2. Определения вязкости крови

ВЯЗКОСТЬ - показатель, характеризующий внутреннее сцепление составных частей крови. Вязкость- это способность оказывать сопротивление течению жидкости при перемещении одних частиц относительно других за счет внутреннего трения. Вязкость имеет большое значение для дви­жения крови по сосудистой системе, т.к. она во много определяет гидродинамические свойства крови. На величину вязкости влияет содержание форменных элементов, гемоглобина и белков плазмы.

Наиболее простым методом определения вязкости крови является наблюдение времени протекания ее через капиллярные трубочки (вискозиметры). Насосать воду в вискозиметр до верхней метки и зажать пальцем выходное отверстие. Определить с помощью секундомера вре­мя вытекания воды (до нижней метки). Проверить трижды. Точно таким же методом определить время вытекания стабилизированной крови из вискозиметра.

Время вытекания крови разделить на время вытекания воды. Полученная величина характеризует вязкость крови. Вязкость крови в 3-6 раз больше вязкости воды. После определения капилляры промыть водой и просушить.

Работа 3. Гемолиз. Осмотическая резистентность

(Устойчивость эритроцитов)

ГЕМОЛИЗ - это выход гемоглобина в плазму (раствор), вызванный повреждением (разрывом или растворением) оболочки эритроцита. Гемолиз может быть вызван воздействием разных повреждающих факторов - механических, термических, химических, осмотических, биологических (гемолизинов).

Осмотический гемолиз происходит при помещении эритроцитов в гипотонический раствор (т.е. раствор с меньшим осмотическим давлением) или в изотонический раствор веществ, способных диффундировать через оболочку эритроцита (мочевина, глюкоза).

Под РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ (устойчивостью) эритроцитов понимают их способность противостоять различным, разрушительным воздействиям. Обычно исследуют резистентность эритроцитов по отношению к гипотоническим растворам хлористого натрия, т.е. их осмотическую устойчивость. В нормальных условиях эритроциты выдерживают концентра­цию хлористого натрия в пределах 0.60…0.40%, не гемолизируясь. У сельскохозяйственных животных наименьшую резистентность имеют эри­троциты овец, коз, свиней, наибольшую - птиц и рыб. В летний период времени резистентноеть эритроцитов животных повышается.

  1. Гемолиз под влиянием физических и химических факторов

Берут три пронумерованные пробирки. В первую пробирку наливают 5 мл дистиллированной воды и 5 капель крови. Во вторую- 5 мл 1% раствора хлорида натрия, 1 мл нашатырного спирта и 5 капель крови. В третью - 5 мл 1% раствора хлорида натрия и 5 капель крови. Все пробирки встряхивают и ставят на 5 минут в штатив (рис. 7.).

Рис. 7. Гемолиз и плазмолиз эритроцитов.

1- физический гемолиз; 2- химический гемолиз; 3-плазмолиз эритроцитов.

ПЛАЗМОЛИЗ - сморщивание, сжатие эритроцитов, в гипертонических растворах (в пробирке раствор мутный, появляется взвесь эритроцитов).

Физический гемолиз – разрыв, разрушение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в плазму (раствор) (в пробирке раствор прозрачный, ярко красного цвета).

Химический гемолиз – растворение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в плазму (раствор) (в пробирке раствор прозрачный темно красного цвета).

Записывают результаты, обращая внимание на степень окраски жидкости и на ее прозрачность.

  1. Определение осмотической резистентности эритроцитов

Приготавливают растворы хлорида натрия различной концентрации из 1% раствора хлорида натрия по следующей схеме (табл. 13):

Таблица 13

№ пробирки

1% раствор хлорида натрия (исходный раствор), мл

Дистиллированная вода, мл

Концентрация (рабочего раствора) хлорида натрия, %

Окраска раствора после центрифугирования

Осадок эритроцитов

Границы резистентности

1

0.9

0.1

0.9

2

0.8

0.2

0.8

3

0.7

0.3

0.7

4

0.6

0.4

0.6

5

0.5

0.5

0.5

6

0.4

0.6

0.4

7

0.3

0.7

0.3

8

0.2

0.8

0.2

В каждую пробирку пипеткой вносят по 2 капли стабилизированной крови, хорошо смешивают и дают постоять 3…5 минут. Затем все пробирки центрифугируют при 2000 об/мин.

По результатам опыта определяют минимальную, максимальную резистентность и ширину резистентности. Занести в таблицу результаты "+" - полный гемолиз, "" - частичный гемолиз, "-" - отсутствие гемолиза.

Минимальная резистентность эритроцитов соответствует концентрации хлорида натрия (0.7…0.5%), обуславливающей частичный гемолиз эритроцитов, в пробирках жидкость слабо окрашена, на дне пробирок имеется осадок эритроцитов.

Максимальная резистентность эритроцитов соответствует концентрации хлорида натрия (0.4…0.2%), обуславливающей полный гемолиз, в пробирках жидкость прозрачна, окрашивается в ярко красный цвет, осадок эритроцитов отсутствует.

ВОПРОСЫ:

1. Что показывает гематокритный показатель?

2. Что такое вязкость крови, как ее определить?

3. Объясните явления гемолиза и укажите его причины.

4. Что называется осмотической резистентностью эритроцитов?

5. Дайте понятие минимальной и максимальной резистентнооти эритроцитов.

6. Что называется изо-, гипо-, гипертоническими растворами хлорида натрия и каково их действие на эритроциты?

ЗАНЯТИЕ 3. СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ). ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ ПО САЛИ И С ПОМОЩЬЮ ЭРИТРОГЕМОМЕТРА

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой определения скорости оседания эритроцитов, выяснить механизм реакции оседания эритроцитов и его значение для клиники, овладеть методикой определения количества гемоглобина по Сали и с помощью эритрогемометра, определить его количество, изучить основные свойства и значение гемоглобина.

Отправить ответ

avatar
  Подписаться  
Уведомление о